Анализ на хеликобактер пилори

Методы диагностики

Определение наличия болезнетворного микроорганизма в желудке возможно при использовании таких эффективных способов диагностики, как:

1. Исследование кала методом ПЦР (полимеразная цепная реакция). Это простой и в то же время очень чувствительный способ диагностирования инфекции в организме. В его основе – исследование фрагмента ДНК бактерии Helicobacter pylori, являющегося носителем наследственной информации. Обнаружение возбудителя инфекции с помощью молекулярной генетической диагностики позволяет определить его наличие даже в том случае, если в пробе есть всего несколько молекул ДНК бактерии. Метод отличается отсутствием каких-либо неудобств и болезненных ощущений. Этот бактериологический анализ определяет наличие паразитов исключительно точно (до 90-95%).
2. ИФА – иммуноферментный анализ. Антиген Helicobacter pylori в ответ на появление возбудителя инфекции начинает вырабатывать иммуноглобулины (антитела). ИФА определяет в крови присутствие антител к паразитарной инфекции. Если они обнаружены, значит, иммунные силы опознали инфекцию и стараются вырабатывать защитные средства. Наличие в тесте иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA говорит о необходимости продолжить обследование, чтобы выяснить, насколько велико отклонение от нормы и опасно ли присутствие бактерии в организме для здоровья пациента.

С этой целью используется метод Вестерн-блоттинг, который рекомендуется при обнаружении антител к паразитарной инфекции. Ценность его заключается в том, что он дает возможность получить дифференцированные сведения об антителах и их количестве.

В качестве биоматериала для гемотеста используется кровь из вены.

Другие методы обнаружения паразита

Несмотря на то что результаты ПЦР кала и ИФА считаются наиболее точными лабораторными данными, в некоторых случаях прибегают к дополнительным диагностическим процедурам.

В качестве вспомогательного обследования могут быть использованы следующие меры:

1. Уреазный респираторный тест. Диагностирование хеликобактерной инфекции при помощи него основывается на выделении бактерией особого вещества – уреазы, которая и защищает ее от агрессивного влияния соляной кислоты. Наличие в дыхательном тесте аммиака и углекислого газа, образующихся в результате воздействия уреазы на мочевину, дает возможность сделать вывод о присутствии в организме паразитарной инфекции. Такой тест рекомендуется проводить малышам и беременным. Он удобный и безопасный.
2. Уреазный экспресс-тест. Исследование аналогично предыдущему тесту. Но в качестве материала для пробы берется соскоб со слизистой оболочки желудка. Он исследуется в среде, содержащей мочевину.
3. Биопсия и гистология. Способ отличается исключительной достоверностью анализа, не допускает ложноположительного результата. Материал для обследования берется с участков слизистой оболочки желудка, на которых предполагается большая степень заселенности микроорганизмами.

Чтобы получить наиболее точную информацию о наличии/отсутствии хеликобактер пилори, используются два или три метода исследования.

Расшифровка результатов

Какие анализы нужно сдать на хеликобактер пилори

В настоящее время способов обнаружения бактерии, продуктов её жизнедеятельности и антител к ней великое множество. Каждый из методов имеет определённые достоинства и недостатки.

Поэтому пациенту рекомендуется сдавать несколько анализов для подтверждения наличия микроба в организме, порекомендовать их должен врач, с учетом конкретного клинического случая и технической оснащённости учреждения, в котором будет проводится диагностика.

Каждому пациенту необходимо пройти ФГДС с биопсией. Далее изучение биоптированной слизистой возможно под микроскопом, экспресс-тестами, либо путем культивированием бактерий на питательных средах.

Не лишним будет сдать кровь и кал для серологической диагностики. Ведь подтверждением инфекции может стать высокий титр антител бактерии или её ДНЕ-фрагменты в испражнениях.

Дыхательный тест – прекрасный неинвазивный способ, позволяющий достоверно подтвердить наличие в организме бактерии и ее активность. И если есть возможность пройти его в лечебном учреждении, следует обязательно её воспользоваться.

Анализы на хеликобактерную инфекцию сдают не только для выявление микроорганизма, но и с целью контроля излеченности. Какие именно нужны исследования, всегда определяет врач.

Какой анализ на хеликобактер пилори самый информативный

Точными анализами являются:

• цитологический метод, когда врач наблюдает наличие бактерии под микроскопом
• культуральный метод – выращивание бактерий на питательных средах
• метод ПЦР-диагностики или молекулярно-генетический – обнаружение генов или ДНК-фрагментов бактерии

Все эти методы основаны на первоначальном взятии биоптата – кусочка слизитой желудка при проведении ФГДС. Они являются инвазивными. Без «глотания трубки» данные методы провести невозможно.

В отличие от методов серологического исследования крови, при котором выявляются антитела, которые косвенно свидетельствуют о нахождении в организме микроба или ферментных методов, которые способны диагностировать продукты его жизнедеятельности, цитология выявляет патогена целиком, собственной персоной.

Мазки высушиваются, окрашиваются специальными красителями и изучаются под микроскопом. Бактерии располагаются в слизи, они S-образной или спиралевидной формы, имеют жгутики на конце тела. Опытный глаз врача-диагноста не спутает данные микроорганизмы с любыми другими.

Культуральный метод позволяет вырастить целую колонию бактерий на специальных питательных средах. Патогены любят среду с низким содержанием кислорода (не более 5%), для их выращивания используют кровяные питательные среды.

При благоприятных условиях, соблюдения температурного режима при культивировании и анаэробных условий, через 3-5 суток на среде вырастают круглые, прозрачные колонии бактерий, которые далее подвергаются идентификации.

ПЦР-методы обнаружения генов и фрагментов хеликобактерных ДНК является информативным, но требует специального оборудования и реактивов. Им располагает не каждое поликлиническое учреждение на сегодняшний день.

Врачи рекомендуют для выявления Н.руlori целью наибольшей информативности использовать три, а лучше четыре метода диагностики: цитологический, культуральный, ПЦР, дыхательный тест.

Какой анализ лучше всего сдать на хеликобактер

Перечень анализов должен определит врач с учетом конкретного случая и цели исследования.

С профилактической целью без жалоб со стороны органов ЖКТ можно воспользоваться неинвазивными методами диагностики (без ФГДС):

• анализ крови для серологического выявления антител к микробу
• анализ кала для ПЦР-диагностики фрагментов ДНК
• дыхательный тест

Также неинвазивные методы рекомендованы после проведения лечения с целью уточнения его эффективности, ослабленным, тяжелобольным пациентам, которым нельзя сделать зонд и произвести инвазивные способы диагностики.

Если имеются жалобы со стороны органов ЖКТ или подозрения на инфицирование – обязательно проведение ФГДС с последующим взятием участка слизистой желудка. В этом случае рекомендованы цитологический, культуральный, уреазный экспресс-тест или ПЦР-диагностика биоптата.

«Золотого стандарта» диагностики микроба не существует. Все методы дополняют друг друга, поэтому использовать нужно несколько из них. Выбор и тактика диагностики – прерогатива лечащего врача.

Что такое коптограма

Копрограмма (иногда ее называют общим анализом кала) – один из лабораторных методов исследования каловых масс, широко используемый в медицине для оценки функции и диагностики заболеваний желудочно-кишечного тракта.

Этот анализ является очень информативным, он помогает оценить моторную и ферментативную функцию кишечника, состояние микрофлоры, заподозрить воспалительный процесс и онкологические заболевания, обнаружить гельминтов.

Основными преимуществами этого анализа являются его высокая информативность, простота исполнения, а самое главное – доступность. Ввиду незрелости пищеварительной системы, копрограмма у детей имеет свои особенности, поэтому на контейнере с материалом для исследования обязательно указывается возраст пациента.

Для проведения ПЦР используют специальный прибор — амплификатор ПЦР-метод является одним из видов молекулярно-генетической диагностики и позволяет определить наличие Helicobacter pylori даже в случае присутствия в материале небольшого фрагмента ДНК бактерии.

Суть метода состоит в многократном умножении анализируемого образца возбудителя заболевания. Для проведения реакции необходим своего рода «каркас», состоящий из двух праймеров – полученных с помощью искусственного синтеза фрагментов ДНК, идентичных нуклеиновой кислоте Helicobacter pylori. Во время реакции между праймерами наращивается цепочка ДНК в случае присутствия в кале фрагмента биоматериала микроорганизма. В случае его отсутствия реакции не происходит.

Реакция проводится при определённых значениях температуры и кислотности среды, состоит из нескольких десятков повторяющихся циклов, для катализа (ускорения реакции) применяется специальный фермент – полимераза. За 30 циклов фрагмент ДНК патологического агента, присутствующий в биоматериале, умножается в миллиард раз, что позволяет с точностью диагностировать инфекцию.

При наличии соответствующих праймеров можно выявить инфицирование цитотоксичными (повреждающими клетки слизистой желудка) видами Helicobacter pylori.

Культуральный анализ

Культуральный анализ (бактериологический посев) является микробиологическим методом исследования.

Биологический материал помещается в специфическую среду, благоприятную для роста бактериальной колонии. По истечении определённого срока (для Helicobacter pylori – более недели) культуру изучают под микроскопом, используя для верной идентификации колонии различные методы – окраску, способность вступать в те или иные биохимические реакции.

Кроме выявления патологического антигена (возбудителя заболевания) метод позволяет провести тест на его чувствительность к антибактериальным препаратам, что сокращает сроки и затраты на лечение, повышает эффективность терапии.

Иммунологические методы анализа

Иммунологические методы основаны на свойстве антител слипаться с антигеном. Для исследования антитела со специальными метками соединяются с анализируемым образцом, в результате, при наличии в материале Helicobacter pylori, образуются комплексы антиген-антитело.

Способы диагностики

Чтобы определить наличие бактерии, используются разные методы исследования. Одним из них становится выявление антигенов в кале. Такой способ является одним из основных и позволяет определить наличие микроорганизма без необходимости проводить эндоскопию. Также может происходить анализ крови, выявляющий наличие в ней антител. Эндоскопическое исследование позволяет рассмотреть стенки желудка, а также взять образцы ткани.

Может проводиться и дыхательный тест. Для его проведения человек принимает внутрь специальное вещество и при выдыхании в случае наличия Хеликобактер пилори это определяется по изменению цвета реагента. Все это фиксируется специальным устройством. Но чаще всего используется анализ на антиген или ПЦР в кале.

Исследование каловых масс

Антиген Хеликобактер пилори является одним из показателей инфицирования и назначается при жалобах, говорящих о язвенной болезни или других патологиях ЖКТ. Исследование назначается в следующих случаях:

1. При появлении симптомов, которые говорят язвенной болезни. К ним относится боль в эпистрагальной области, чувство тяжести, тошнота и рвота.
2. Во время определения эффективности лечения заболевания, вызываемого Хеликобактер пилори, чтобы предвидеть очередной рецидив.
3. Когда необходимо подтверждение того, что инфекции больше нет.

Результаты

При результате, говорящем об инфицировании Хеликобактер пилори, можно говорить об имеющемся высоком риске развития язвенной болезни, гастрита и раковой опухоли. При отрицательном результате бактерии в организме нет. Но если во втором случае у человека все равно проявляются признаки заболеваний ЖКТ, то пройти обследование стоит еще раз через 2 недели. Если лечение заболевания уже происходило, то в этом случае при положительном результате через неделю после прохождения всего курса можно говорить о неэффективности. Если же через месяц после этого имеется Хеликобактер пилори не находят, то это свидетельствует о полном уничтожении возбудителя заболевания.

Исследование кала для того, чтобы определить есть ли антиген, может назначать гастроэнтеролог, терапевт, а также педиатр, хирург и инфекционист.

Исследование генетического материала в каловых массах

Суть метода заключается в определении наличия генетического материала Хеликобактер пилори в кале. Анализ применяется врачами для того, чтобы определить причины язвенной болезни, гастрита, а также эффективность лечебных мер.

ПЦР-диагностика характеризуется высокой чувствительностью и точностью результата. Анализ на антиген является одним из наиболее эффективных способов определения наличия в организме бактерии. Кроме этого способа и ПЦР врачи часто используют эндоскопию.

Антиген лямблий в кале, что это такое, как сдавать анализ, зачем он нужен? Вопросы интересуют людей, которых просят сдать кал на исследование в очередной раз, после неудачных попыток копрологии каловых масс.

Существуют такие методы диагностики лямблиоза:

Преимущества и недостатки

Преимущества ИФА на наличие хеликобактер пилори

К плюсам относят следующее:

• высокая эффективность (более 92%) исследования; IgG выявляют в 95–100% случаев заражения хеликобактер пилори, IgA – в 67–82%, IgM – в 18–20%;
• обнаружение патогена на ранних сроках заражения;
• возможность отслеживать отклонения от нормы и динамику заболевания, сравнивая титры иммуноглобулинов в разные периоды;
• доступность анализа.

Анализ на концентрацию антител актуален, если не планируется выполнение эндоскопии.

Исследование на IgG применяют для выявления первичного инфицирования у пациента с начальными симптомами нарушения функции органов пищеварения. В этом случае высокое содержание IgG даёт повод заподозрить развитие активной инфекции.

Положительный результат теста у больного (с симптоматикой или без неё), не получавшего до этого никакого лечения, также укажет на инфицирование хеликобактериозом.

Недостатки метода

ИФА способен показать иммунный ответ на инфекцию, но не диагностировать наличие самой бактерии.

Антитела IgG обнаруживаются только через 20–30 дней после внедрения в организм Helicobacter pylori, поскольку иммунный ответ срабатывает с некоторой задержкой. Отсюда проистекают следующие недостатки иммуноферментного анализа крови:

1. Вероятность ложного отрицательного результата анализа у заражённых больных. Это происходит, если микроб впервые проник в организм, но система защиты пока не отреагировала на экспансию патогенов выработкой антител.
2. Ложный положительный результат у вылечившихся пациентов. Антитела IgG сохраняют присутствие в крови уже после полного уничтожения микроорганизма и при отсутствии гастрологических проявлений. Это особенно показательно у людей преклонного возраста. Значит – результат ИФА на хеликобактер может быть реакцией на давно вылеченную инфекцию.
3. Вероятность ложного положительного результата, если до анализа уже проводилось лечение антибиотиками. Или антибактериальные препараты, действующие против инфекции, применялись в других целях. Концентрация IgG остаётся повышенной до полутора лет у 50% пациентов, вылечившихся от хеликобактериоза. Поэтому при положительном результате анализа у больного, ранее принимавшего антибиотики, сложно отличить состояние инфекционного процесса в действии и инфекцию подавленную и слабую, что требует дополнительных исследований.
4. Малые титры обнаруживаются при использовании определённых цитостатических средств.
5. Сложность проведения точной дифференциальной диагностики между пассивным заселением полости желудка патогенами H. pylori и заболеванием в острой форме. Это невозможно без учёта других данных.

При развитии хеликобактериоза концентрация иммуноглобулина IgG в сыворотке крови зависит от уровня активности заболевания и снижается после ликвидации патогенной бактериальной среды. В отличие от иммуноглобулина типа G антитела A и М выявляются в крови гораздо раньше после заражения. Кроме того, IgА поддаётся обнаружению в желудочном соке и слюне заражённого хеликобактериозом, что является симптомом заражения самой высокой степени активности.

Достоверность результатов анализа кала

К сожалению, ни один из вышеперечисленных методов не может со 100-процентной гарантией указывать на присутствие в организме инфекции этого типа.

Не является исключением и исследование кала с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Объясняется это не недостаточной эффективностью самого метода, а факторами, способными привести к неточному диагностированию.

Среди них следует отметить такие ситуации:

1. Анализируемый фрагмент кала может содержать различные компоненты, влияющие на результат определения наличия бактерии. Это присутствие в пробе крови, неорганических солей и других веществ.
2. Положительный, равно как и отрицательный, результат может быть спровоцирован приемом антибиотиков (Метронидазола, Тетрациклина) и других медикаментозных препаратов.
3. Чаще всего неточность наблюдается вследствие неправильной подготовки пациента к анализу или ошибок при сборе материала.

Именно поэтому рекомендуется использование нескольких методов исследования биологического материала.

Хеликобактер пилори — что это такое

Более половины населения планеты являются носителями патогенного возбудителя, однако не для всех микроб опасен. Хеликобактер пилори — это грамотрицательная бактерия спиралевидной формы.

Характеризуется устойчивостью в кислой среде желудка и способностью ее ощелачивать. Поэтому организм с ней не борется. Высокая выживаемость во внешней среде и в верхних отделах желудочно-кишечного тракта связана со способностью к видоизменению. Шаровидная и кокковая форма обеспечивает сохранение свойств в неблагоприятных условиях, снижает чувствительность к антибиотикам.

Хеликобактер пилори – это спиралевидная бактерия, обитающая в некоторых отделах желудка и двенадцатиперстной кишки, размерами около 3 на 0,5 мкм. Благодаря своим 4–6 жгутикам, как выглядит на фото, она обладает способностью быстро передвигаться в густой слизи желудка.

Хеликобактер уникален своими возможностями выживания в самой агрессивной среде человеческого организма. В полости желудка не может выжить (мы даже не говорим об активном росте и размножении), ни какой другой микроб. Он способен локально нейтрализовать (защелачивать) желудочный сок и образовывать вокруг себя особый «скафандр» – биопленку, защищающую ее от кислоты, иммунитета человека и антибиотиков. К тому же микроорганизм пробирается через защитный слизистый барьер к покровному эпителию желудка и 12-перстной кишки, где кислотность намного меньше, и образует целые колонии. Этот фактор наиболее опасен для целостности слизистых оболочек.

Валерий Степура, врач, кандидат медицинских наук

Чем питается бактерия

Благодаря наличию жгутиков микроб способен перемещаться на слизистой оболочке, быстро колонизируя поверхность органа. Белковые и липополисахаридные структуры Helicobacter pylori адгезируются на мембранах тканей.

Бактерия питается эпителиальными клетками желудка, выделяя особые ферменты. Среди них важную патогенетическую роль играет уреаза. Путем расщепления мочевины образуется аммиак, который изменяет рН в щелочную сторону. Происходит химическое раздражение и иммунная воспалительная реакция с последующим разрушением клеток. В ответ на проникновение бактерии в слизистую оболочку начинает синтезироваться гастрин, который формирует повышенный уровень соляной кислоты. Это приводит к увеличению кислотности желудка и прогрессированию воспаления.

Хеликобактер пилори проявляет тропность (нацеленность, ориентированность) к поверхностным клеткам эпителия слизистой оболочки желудка. И, как присуще любому вредителю, – бактерия питается «плотью хозяина» – эпителиальными клетками слизистой, к которым «неравнодушна». Излюбленной локализацией и «пастбищем» патогенной бактерии является антрум – антральный отдел желудка (на рисунке выделен зеленым цветом).

В антруме, за счет слизистого секрета его желез, происходит тотальная или частичная нейтрализация свободной соляной кислоты (до pH = от 4 до 8). Это создает оптимальные условия для активации возбудителя и его внедрения в железистый эпителий слизистой оболочки «на постоянное место жительства».

Более кислая среда желудка (pH < 3,5) приводит к подавлению активности Хеликобактер пилори, но не способна ее уничтожить. При малейшем удобном случае, своими спиралевидными «усиками» она пробуравливает тоннель через защитный слой слизи с концентрацией бикарбонатов к слизистой оболочке желудка и «нападает» на клетки эпителия его стенок.

Там, – в толще эпителиальных клеток слизистой оболочки, Хеликобактер пилори надежно защищена от соляной кислоты и не требует для своего развития много кислорода: она микроаэрофильна – почти не нуждается в кислороде.

Кроме того, имея фермент гидрогеназу, бактерия получает энергию от окисления молекулярного водорода, образуемого другими кишечными бактериями.

Валерий Степура, врач, кандидат медицинских наук

Какие органы поражает кроме желудка

Местом основной локализации является желудок. В большей степени размножение бактерии происходит в пилорическом отделе и дне органа. Также возбудитель обнаруживают в ротовой полости, пищеводе и двенадцатиперстной кишке. У пожилых людей ввиду атрофии слизистой желудка Хеликобактер перемещается в нижние отделы желудочно-кишечного тракта и его можно выявить в каловых массах. Поэтому диагностика инфекции на усмотрение врача может быть расширена.

Расшифровка результатов, показатель нормы

Существует количественное и качественное определение иммуноглобулинов G, A и М к Helicobacter pylori в плазме крови.

1. Качественный показатель говорит о наличии и отсутствии антител без количественной оценки. В норме, если пациент не болен, антитела отсутствуют. В этом случае в лабораторной выписке значится, что анализ на антитела к Н. Pylori отрицательный.
2. Показатели количества IgG, IgA и IgМ базируются на референтных (пороговых) значениях, означающих норму, с которыми сравнивают полученные данные.

Референтные нормы в лабораториях различаются по цифровым показателям и оцениваются в разных единицах. Однако на бланке результатов анализа проставляют цифры для «нормы» и отклонения от референтных значений. При расшифровке нужно учитывать, какие титры иммуноглобулинов: ниже порогового показателя означают отрицательный результат теста, выше – положительный.

Таблица №1: Референтные значения иммуноглобулинов в единицах измерения Ед./мл

Много лабораторий отмечают показатели, при которых результат анализа ИФА расценивается как «сомнительный». Это причина для повторения сдачи анализа через 14–20 дней для уточнения диагноза.

Таблица №2: Интерпретация теста на титры иммуноглобулина G к Helicobacter pylori

Уточнённый диагноз устанавливается после совокупной оценки результатов анализа крови ИФА на хеликобактер пилори с изучением показателей наличия трёх классов антител к данной бактерии.

Структура антител — иммуноглобулинов A, G, M против хилорибактер пилори

Таблица №3: Расшифровка титров антител анализа ИФА в единицах измерения ИФЕ       

Повышенные титры трёх классов иммуноглобулинов G, A и М свидетельствуют об агрессивности инфекционного процесса.

Понижение концентрации IgG до 2 % в течение полугода говорит об уничтожении H. pylori. Но если титры не снижаются, это ещё не означает, что лечение плохое. Отсутствие антител IgG при проведении повторного теста свидетельствует о результативности терапии и подавлении бактерии. Проводить анализ желательно и после завершения терапии, на 10–12 неделе. В таком случае титр иммуноглобулинов G к хеликобактер пилори при подавлении инфекции снижается на 50% и более.

При подавлении патогенной бактерии наблюдается тенденция к явному снижению остроты воспалительного процесса в желудочной полости.

Если желудочно-кишечные симптомы при выявлении H. pylori отсутствуют – это является показателем того, что желудок заселен болезнетворными микробами, но развития хеликобактериоза не происходит.